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凱氏定氮法結(jié)合前處理技術(shù)測(cè)定飼料真蛋白含量的應(yīng)用

飼料中蛋白質(zhì)含量是衡量其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的核心指標(biāo),但傳統(tǒng)粗蛋白檢測(cè)常受非蛋白氮干擾,無(wú)法真實(shí)反映飼料對(duì)動(dòng)物的實(shí)際營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。本文采用凱氏定氮法結(jié)合前處理工藝,精準(zhǔn)測(cè)定飼料中蛋白含量,為飼料品質(zhì)鑒定提供可靠方法。


凱氏定氮法結(jié)合前處理技術(shù)測(cè)定飼料真蛋白含量的應(yīng)用


一、實(shí)驗(yàn)原理與材料準(zhǔn)備

測(cè)定原理
在催化劑(如硫酸銅等)作用下,樣品經(jīng)濃硫酸高溫消化,有機(jī)氮被氧化、分解并轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)銨鹽 。隨后加入強(qiáng)堿(如氫氧化鈉)營(yíng)造堿性環(huán)境,銨鹽與堿反應(yīng)釋放出氨,氨隨水蒸氣蒸餾分離,被過(guò)量硼酸溶液吸收 。吸收氨后的硼酸溶液,用已知濃度的鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,依據(jù)酸堿反應(yīng)的計(jì)量關(guān)系,通過(guò)消耗酸的量計(jì)算樣品中氮的含量 ,完成從有機(jī)氮到可測(cè)氮量的轉(zhuǎn)化與定量分析 。

儀器與試劑
儀器:粉碎機(jī); 感量0.1mg分析天平; 格丹納 N810免水全自動(dòng)凱氏定氮儀; DNS-20石墨消解爐;
試劑:98%濃硫酸、10%硫酸銅溶液、40%氫氧化鈉溶液、2.5%氫氧化鈉溶液、20g/L硼酸、0.1011mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液等。


二、實(shí)驗(yàn)步驟

樣品前處理

將風(fēng)干飼料粉碎后過(guò)40目篩,精確稱(chēng)取約0.5g試樣(精確至0.0001g)置于250mL燒杯中,加入75mL蒸餾水,加熱至沸并保持30分鐘。

依次加入2.5%氫氧化鈉溶液20mL和10%硫酸銅溶液20mL,充分?jǐn)嚢韬笪⒎?,冷卻放置2小時(shí)以上。

用定性濾紙過(guò)濾,用70-80℃熱水沖洗沉淀5次以上,直至用5%氯化鋇溶液和鹽酸檢查濾液無(wú)白色硫酸鋇沉淀(確認(rèn)洗滌干凈)。

將沉淀與濾紙?jiān)?5℃烘箱中烘干。同時(shí)設(shè)置對(duì)照樣品:樣品不做沉淀處理直接消化,其兩個(gè)樣品添加0.0636g尿素,添加0.1135g硫酸銨。

消化與檢測(cè)

消化:將干燥后的沉淀與濾紙放入消化管,加入15mL濃硫酸、3g硫酸鉀和0.2g硫酸銅,采用梯度升溫程序(200℃/30min→320℃/30min→400℃/90min)在石墨消解爐上消化,同時(shí)做空白試驗(yàn)。

測(cè)試:將冷卻后的消化管置于免水全自動(dòng)凱氏定氮儀,設(shè)置參數(shù)為硼酸20mL、堿60mL、稀釋水10mL,開(kāi)始蒸餾,自動(dòng)計(jì)算并打印結(jié)果。


三、結(jié)果與分析

空白與粗蛋白測(cè)定

樣品空白消耗滴定酸體積平均值為0.5421mL,為結(jié)果校正提供基準(zhǔn)。
未處理樣品的粗蛋白含量平均值為15.5480%,反映了包含非蛋白氮的總含氮量。

真蛋白測(cè)定結(jié)果

經(jīng)沉淀處理的樣品中,因過(guò)濾損失結(jié)果偏低,舍去后其余樣品真蛋白含量平均值為13.6072%。
對(duì)比可知,粗蛋白與真蛋白含量相差近2%,表明飼料中存在非蛋白氮成分。加尿素和加硫酸銨的真蛋白含量與其他樣品接近,驗(yàn)證了該方法能有效排除非蛋白氮干擾。

結(jié)論

該方法通過(guò)前處理去除非蛋白氮,結(jié)合凱氏定氮法精準(zhǔn)測(cè)定真蛋白,操作可行、結(jié)果可靠,可用于飼料真蛋白的實(shí)際檢測(cè)。本方法僅供參考。

參考方法
GB/T 6432 - 2018《飼料中粗蛋白的測(cè)定 凱氏定氮法》

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